摘 要：目的：探索相關(guān)炎癥因子及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）表達(dá)在痔瘡中的作用及其可能的分子機(jī)制。方法：選取本院2020年6—12月肛腸科收治的30例住院痔瘡患者為研究對(duì)象，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測(cè)術(shù)前痔組織標(biāo)本與術(shù)前及術(shù)后第3 d、第7 d血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-10(IL-10)、高遷移率族蛋白B1(HMGB1)、VEGF含量。結(jié)果：術(shù)前血清和痔組織中TNF-α、IL-10、HMGB1水平及VEGF的表達(dá)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；術(shù)前血清TNF-α、IL-10、HMGB1水平及VEGF的表達(dá)均高于術(shù)后第3 d、第7 d，組間比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；術(shù)后第3 d血清中TNF-α、IL-10、HMGB1水平及VEGF表達(dá)均高于術(shù)后第7 d，組間比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：痔瘡患者術(shù)前的TNF-α、IL-10、HMGB1水平及VEGF表達(dá)高于術(shù)后，提示TNF-α、IL-10、HMGB1炎癥因子及VEGF表達(dá)可能參與了痔瘡的形成。
關(guān)鍵詞：痔瘡; 腫瘤壞死因子-a;白細(xì)胞介素-10;高遷移率族蛋白B1;血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子;
痔瘡在肛腸疾病中最為常見，可以發(fā)生在任何年齡，但隨著年齡增長(zhǎng)，其發(fā)病率逐漸升高[1]。我國(guó)幾項(xiàng)人口疾病調(diào)查研究報(bào)告顯示，約59.3%的患者患有肛腸疾病，其中86.75%患者患有痔瘡[2,3]。根據(jù)國(guó)際調(diào)查研究報(bào)告可以發(fā)現(xiàn)，痔病的臨床發(fā)病率為63%～70%,20歲以前很少出現(xiàn)痔瘡，30歲以上人群的痔瘡發(fā)病率上升，30歲以上患者的發(fā)病率為68%，通常45～65歲人群為痔瘡的高發(fā)人群[4]。根據(jù)2020年中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)大腸肛門病專業(yè)委員會(huì)制定的《中國(guó)痔病診療指南》，痔瘡按發(fā)病部位可以分為內(nèi)痔、外痔及混合痔三種，根據(jù)痔的脫垂程度可將內(nèi)痔分為4度，而混合痔是內(nèi)痔和相應(yīng)部位外痔相互融合成的一個(gè)整體，主要臨床表現(xiàn)是內(nèi)痔和外痔的癥狀都有[5]。在臨床實(shí)踐中我們發(fā)現(xiàn)，對(duì)于Ⅰ度痔瘡和輕Ⅱ度痔瘡，一般可通過(guò)飲食調(diào)整、口服靜脈活性藥物、中草藥聯(lián)合局部外用藥物（栓劑、洗劑、膏劑）等保守方法治療，其臨床療效十分顯著；但是對(duì)重Ⅱ度及Ⅲ～Ⅳ度痔瘡患者采用保守治療效果較差，癥狀無(wú)法消除，患者的日常生活會(huì)受到嚴(yán)重影響，最后只能選擇外科手術(shù)治療，然而手術(shù)治療痔瘡后往往會(huì)導(dǎo)致膿腫等并發(fā)癥，影響患者的治療效果[6]。因此，探索痔瘡發(fā)病的分子機(jī)制對(duì)臨床痔瘡治療和預(yù)防具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本項(xiàng)目通過(guò)前瞻性收集痔瘡患者的臨床資料，探索相關(guān)炎癥反應(yīng)及VEGF表達(dá)在痔瘡中的作用及其可能的分子機(jī)制。
1 資料與方法
1.1 主要儀器和試劑
主要儀器：酶標(biāo)儀，美國(guó)伯樂(lè)公司；高精度微量移液器及槍頭，0.5～10μL、2～20μL、20～200μL、200～1000μL;DHG-9091A干燥箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；手術(shù)剪、1.5 m L離心管、紗布；高速組織研磨儀，上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司，型號(hào)：Tiss-24；分析電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司，ISO9001；低溫高速離心機(jī)；渦旋震蕩儀。
實(shí)驗(yàn)試劑（均采用上海江萊生物科技有限公司的試劑）：人白細(xì)胞介素-10(IL-10）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)試劑盒（JL19246）；人腫瘤壞死因子-α（TNF-α）ELISA檢測(cè)試劑盒（JL10208）；人高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA檢測(cè)試劑盒（JL13693）；人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF)ELISA檢測(cè)試劑盒（JL18341）。
1.2 一般資料
選取本院2020年6—12月肛腸科收治的30例住院痔瘡患者為研究對(duì)象，所有患者均符合《中國(guó)痔病診療指南》的相關(guān)臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)。
納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合上述指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)。(2)患者痔瘡急性發(fā)作以疼痛、水腫、便鮮紅色血、黏膜改變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)。(3)發(fā)病年齡為20～60歲。(4)肛門既往無(wú)手術(shù)病史。術(shù)前肛門形態(tài)及功能正常者。(5)無(wú)明顯手術(shù)禁忌證。(6)治療依從性較好。(7)臨床資料完整。(8)所有患者均自愿簽署手術(shù)同意書。
排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)不符合上述指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)疼痛、水腫、便鮮紅色血、黏膜改變甚至局部感染的急性發(fā)作期患者。(2)同性戀患者。(3)妊娠及哺乳期婦女。(4)精神異常的患者。(5)伴有全身性疾病的患者，如嚴(yán)重的冠心病、嚴(yán)重的糖尿病、嚴(yán)重的血液系統(tǒng)等原發(fā)性疾病。(6)克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、腸結(jié)核、晚期肛管直腸癌患者。(7)人類免疫缺陷病毒、梅毒等傳染病患者。(8)參加其他臨床研究的患者。(9)未堅(jiān)持完成一療程者。
1.3 標(biāo)本采集
血清標(biāo)本采集：分別采集患者術(shù)前1 d和術(shù)后3 d、7 d外周靜脈血標(biāo)本5 m L,3 000 r/min離心15 min后，EP管封裝，置于-80℃冰箱保存待檢。痔組織標(biāo)本采集：患者均做好血常規(guī)、糞便常規(guī)、尿常規(guī)、肝功能、腎功能、血糖、凝血功能、人類免疫缺陷病毒、梅毒、丙型肝炎病毒、乙肝兩對(duì)半、常規(guī)心電圖、肺部CT等相關(guān)術(shù)前檢查。詳細(xì)告知患者及其家屬病情及手術(shù)方案，同時(shí)簽署手術(shù)同意書；術(shù)前禁食、禁飲10 h；術(shù)前備皮，開塞露灌腸做好腸道準(zhǔn)備。患者均在腰硬聯(lián)合麻醉下行選擇性痔上黏膜切除釘合術(shù)（TST術(shù)），采集痔瘡組織標(biāo)本，大小約0.4 cm×0.8 cm，置于液氮罐中，于-80℃冰箱保存待檢。
1.4 方法
采用ELISA法檢測(cè)血清和痔組織標(biāo)本中TNF-α、IL-10、HMGB1、VEGF含量，具體檢測(cè)方法嚴(yán)格按照免疫試劑盒說(shuō)明書執(zhí)行，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，計(jì)算出血清和痔組織標(biāo)本中TNF-α、IL-10、HMGB1、VEGF含量。
1.5 觀察指標(biāo)
患者依據(jù)臨床評(píng)估，給予手術(shù)切除治療，分別于術(shù)后第3 d、第7 d對(duì)患者的臨床癥狀進(jìn)行觀察及評(píng)分。顯效的患者積分下降≥75%，有效的患者積分下降40%～75%，無(wú)效患者積分≤40%。患者痔瘡急性發(fā)作期的臨床癥狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)具體如下：(1)疼痛。無(wú)（0分）；輕微疼痛或間歇性疼痛，可以耐受的疼痛（1分）；難以忍受需要口服止痛藥治療（2分）；需要口服止痛藥治療、無(wú)法睡眠休息（3分）。(2)便血。無(wú)（0分）；染紙帶血（1分）；滴血（2分）；噴血（3分）。(3)水腫。無(wú)（0分）；<1cm2(1分）；1～2cm2(2分）；>2cm2(3分）。(4)黏膜改變。無(wú)（0分）；充血（1分）；充血、輕度糜爛（2分）；重度糜爛（3分）。
1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。三組以上樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 臨床療效
術(shù)后第3 d對(duì)患者癥狀進(jìn)行觀察評(píng)分，有效率達(dá)90.0%，術(shù)后第7 d有效率達(dá)100.0%，見表1。
表1 臨床療效[n(%)]
2.2 炎癥因子及VEGF的表達(dá)
術(shù)前血清與痔組織中TNF-α、IL-10、HMGB1水平及VEGF表達(dá)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表2。術(shù)前血清炎癥因子及VEGF的表達(dá)均高于術(shù)后第3 d、7 d，組間比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；術(shù)后第3 d血清中TNF-α、IL-10、HMGB1水平及VEGF均高于術(shù)后第7 d，組間比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。
表2 術(shù)前血清及痔組織炎癥因子及VEGF的表達(dá)水平比較?s,pg/m L)
表3 術(shù)前、術(shù)后第3?d、術(shù)后第7?d血清炎癥因子及VEGF的?表達(dá)水平比較
注：與術(shù)前比較，(1)P<0.05；與術(shù)后第3 d比較，(2)P<0.05。
3 討論
痔瘡屬于一種慢性疾病，形成周期較長(zhǎng)，其發(fā)病機(jī)制至今仍不完全清楚，有肛墊下移學(xué)說(shuō)、靜脈曲張學(xué)說(shuō)、細(xì)菌感染學(xué)說(shuō)、便秘學(xué)說(shuō)等[7,8]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為痔瘡的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，特別是痔瘡的急性發(fā)作期，患者疼痛不適、便血，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。本研究對(duì)術(shù)后第3 d患者癥狀進(jìn)行觀察評(píng)分，有效率達(dá)90.0%，到了術(shù)后第7 d有效率達(dá)100.0%，可以發(fā)現(xiàn)對(duì)于痔瘡急性發(fā)作的患者行手術(shù)治療，可以最大限度縮短病程，減輕患者痛苦，達(dá)到快速康復(fù)的目的。術(shù)前血清及痔組織炎癥因子及VEGF的表達(dá)水平比較無(wú)明顯差異性，說(shuō)明術(shù)前血清和痔組織中TNF-α、IL-10、HMGB1、VEGF的含量是一樣的；而術(shù)前血清中TNF-α、IL-10、HMGB1含量較術(shù)后第3 d、第7 d均更高，說(shuō)明混合痔術(shù)后可降低炎性因子水平，提示TNF-α、IL-10、HMGB1等炎癥相關(guān)因子在痔瘡發(fā)病中發(fā)揮重要作用。VEGF是血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性的肝素結(jié)合生長(zhǎng)因子，可在體內(nèi)誘導(dǎo)血管新生。該因子可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、延長(zhǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞壽命，同時(shí)增加毛細(xì)血管通透性，為血管內(nèi)皮的遷移及血管形成提供物質(zhì)基礎(chǔ)，能有效地促進(jìn)血管再生，在血管形成中發(fā)揮著重要作用。由于直腸上靜脈屬于門靜脈系統(tǒng)，因其無(wú)靜脈瓣，使血液不易回流，加上直腸上、下靜脈叢管壁薄，位置淺，易出現(xiàn)血液淤積。本研究發(fā)現(xiàn)術(shù)前VEGF表達(dá)水平高于術(shù)后第3 d、第7 d，說(shuō)明VEGF在血管生成生長(zhǎng)中具有重要作用，VEGF可能是促進(jìn)痔瘡血管增殖的重要因素。通過(guò)本研究可以發(fā)現(xiàn)，TNF-α、IL-10、HMGB1等相關(guān)炎癥因子及VEGF表達(dá)可能參與了痔瘡的形成，也為痔瘡預(yù)后預(yù)測(cè)及新型治療藥物的研發(fā)提供了一種新的方向。
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文章名稱：相關(guān)炎癥因子及VEGF表達(dá)在痔瘡中的作用研究
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