14次 摘要：為探究PPAR與c/EBP基因在蘇太豬不同組織中的表達(dá)與脂肪沉積的關(guān)系,本實(shí)驗(yàn)以10月齡蘇太豬為研究對(duì)象,運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR (q RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)PPAR與c/EBP基因mRNA在蘇太豬心、肝、脾、肺、腎、胃、背最長(zhǎng)肌和皮下脂肪8個(gè)組織中的表達(dá)水平。結(jié)果表明,PPA --> 摘要：為探究PPARγ與c/EBPα基因在蘇太豬不同組織中的表達(dá)與脂肪沉積的關(guān)系,本實(shí)驗(yàn)以10月齡蘇太豬為研究對(duì)象,運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR (q RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)PPARγ與c/EBPα基因mRNA在蘇太豬心、肝、脾、肺、腎、胃、背最長(zhǎng)肌和皮下脂肪8個(gè)組織中的表達(dá)水平。結(jié)果表明,PPARγ與c/EBPα基因在蘇太豬的8個(gè)組織中均有不同程度的表達(dá),其中,PPARγ基因在蘇太豬脾臟組織中的表達(dá)量最高,皮下脂肪中的表達(dá)水平僅次于脾;以背最長(zhǎng)肌中PPARγ基因的相對(duì)表達(dá)量作對(duì)比,背最長(zhǎng)肌與脾、肺和皮下脂肪的相對(duì)表達(dá)差異極顯著(p<0.01),其余為差異不顯著(p>0.05),表達(dá)量高低順序?yàn)槠?gt;皮下脂肪>肺>心>胃>腎>肝>背最長(zhǎng)肌;c/EBPα基因在蘇太豬的皮下脂肪的表達(dá)量最高,以背最長(zhǎng)肌中c/EBPα基因的相對(duì)表達(dá)量作對(duì)比,在肝、脾、皮下脂肪組織中表達(dá)差異極顯著(p<0.01),肺的相對(duì)表達(dá)差異顯著(p<0.05),其余組織中差異不顯著(p>0.05),表達(dá)量的高低順序?yàn)槠は轮?gt;肝>脾>肺>腎>心>胃>背最長(zhǎng)肌。兩基因在各組織中表達(dá)趨勢(shì)趨于一致。試驗(yàn)結(jié)果表明PPARγ和c/EBPα基因可能對(duì)豬脂肪沉積有重要影響。 關(guān)鍵詞：蘇太豬; PPARγ; c/EBPα; RT-PCR; 表達(dá)量; 蘇太豬是以中國(guó)太湖豬為基礎(chǔ)母本與杜洛克經(jīng)過(guò)多年的雜交選育而來(lái)，屬于瘦肉型豬種(華金弟等,2003)，既有太湖豬的高繁殖性能，又有杜洛克、長(zhǎng)白豬和大白豬瘦肉率高的優(yōu)點(diǎn)(徐朵燕,2012)。本試驗(yàn)以脂肪沉積相關(guān)基因PPARγ與c/EBPα為候選基因，研究蘇太豬不同組織中PPARγ與c/EBPα基因mRNA的表達(dá)水平。近年來(lái)的研究表明脂肪沉積對(duì)肉品質(zhì)的影響突出，而肌內(nèi)脂肪(intramuscular fat,IMF)含量是影響肉品質(zhì)的主要因素，與肉的風(fēng)味、嫩度、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值等肉質(zhì)性能相關(guān)(王怡平等,2017)，且IMF的含量與肉質(zhì)性狀表現(xiàn)為正相關(guān)(宋代軍,2014)，因此，探究PPARγ與c/EBPα基因在蘇太豬中不同組織的表達(dá)規(guī)律，對(duì)蘇太豬肉質(zhì)性狀的研究具有重要意義。 過(guò)氧化物酶體增殖物活化受體γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)具有調(diào)節(jié)脂肪形成、糖脂代謝和細(xì)胞增殖分化等生物學(xué)功能(White and Stephens,2010)。PPARγ是核內(nèi)受體轉(zhuǎn)錄因子超家族成員之一，核內(nèi)受體轉(zhuǎn)錄因子超家族成員(PPARs)包括α、β和γ3種亞型，各自由不同的基因編碼，PPARs能促進(jìn)脂質(zhì)的合成，在許多組織中均有表達(dá)(Yan et al.,2015)，而在這幾個(gè)亞型中PPARγ在脂肪代謝過(guò)程中作用更明顯(林婄婄等,2012)。研究證明PPARγ在脂肪細(xì)胞分化中起重要作用，是脂肪組織生長(zhǎng)發(fā)育的主要調(diào)控及轉(zhuǎn)錄因子，其信號(hào)通路可直接影響脂質(zhì)代謝(Tontonoz et al.,1994)。Adams等(1997)研究發(fā)現(xiàn)PPARγ的表達(dá)量與脂肪生成在早期呈正相關(guān)變化。高霞等(2017)通過(guò)誘導(dǎo)豬DFAI細(xì)胞成脂再分化并檢測(cè)過(guò)程中PPARγ的表達(dá)，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)隨著誘導(dǎo)時(shí)間增加，脂滴數(shù)量增多，體積增大，PPPARγmRNA的表達(dá)量也隨著誘導(dǎo)時(shí)間的增加而上升。CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein alpha,c/EBPα)是堿性亮氨酸拉鏈蛋白家族的一員，堿性亮氨酸拉鏈蛋白家族是一類在前脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中起關(guān)鍵作用的轉(zhuǎn)錄因子之一(于莎莉等,2011)，它有6種同分異構(gòu)體，分別為c/EBPα、c/EBPβ、C/EBPδ、c/EBPγ、c/EBPε和c/EBPζ，且c/EBPα在脂肪細(xì)胞分化、發(fā)育過(guò)程中起著關(guān)鍵性作用，可以激活一些脂肪細(xì)胞分化相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)(皇甫一凡,2013;盤(pán)道興等,2017)。CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白家族中c/EBPα蛋白是第一個(gè)被證明在脂肪細(xì)胞分化過(guò)程中起重要作用的蛋白(王啟貴等,2006)。有研究指出c/EBPα缺陷的小鼠出生后不久便因?yàn)榈脱撬劳觯?jīng)檢測(cè)得出脂肪組織中脂質(zhì)的積累顯著地降低(Wang et al.,1995)。 在激素核受體超家族成員中PPARγ最具脂肪組織特異性，對(duì)脂肪細(xì)胞的分化起著重要的作用。而在c/EBP家族中，c/EBPα可促進(jìn)PPARγ的高表達(dá)，保持分化細(xì)胞的表型，在脂肪細(xì)胞的分化過(guò)程中起著關(guān)鍵性的作用，說(shuō)明c/EBPα與PPARγ存在著相互作用(劉毅等,2008)。有研究表明，外源表達(dá)PPARγ與c/EBPα基因能將體外培養(yǎng)的成肌細(xì)胞轉(zhuǎn)化為脂肪細(xì)胞(姜美華等,2013)。因此，PPARγ與c/EBPα基因可作為研究脂肪在豬的不同組織表達(dá)水平的候選基因。本試驗(yàn)通過(guò)qRT-PCR技術(shù)對(duì)PPARγ基因與c/EBPα基因m RNA在蘇太豬的心、肝、脾、肺、腎等8個(gè)不同組織的表達(dá)水平進(jìn)行測(cè)定分析，以探究PPARγ與c/EBPα基因在蘇太豬脂肪沉積的影響，為進(jìn)一步研究蘇太豬脂肪沉積相關(guān)基因提供基礎(chǔ)參考。 1 結(jié)果與分析 1.1 引物擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè) 目標(biāo)基因(PPARγ,c/EBPα)和內(nèi)參基因(GAPDH)通過(guò)普通PCR擴(kuò)增獲得。再用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)得到的擴(kuò)增產(chǎn)物(圖1)，結(jié)果可見(jiàn)產(chǎn)物特異性強(qiáng)，未發(fā)現(xiàn)有引物二聚體，且擴(kuò)增片段與目的片段大小一致，可用于下一步試驗(yàn)。 1.2 qRT-PCR的擴(kuò)增曲線和溶解曲線 從熒光定量PCR反應(yīng)后得到的擴(kuò)增曲線和溶解曲線可以看出(圖2;圖3)，基因在不同組織中擴(kuò)增曲線呈現(xiàn)完好的“S”形狀。循環(huán)閾值(CT)處于擴(kuò)增曲線的對(duì)數(shù)期，大小適當(dāng)，從溶解曲線可看出c/EBPα與PPARγ基因均表現(xiàn)為單峰，無(wú)其他非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物和引物二聚體，表明定量試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，符合試驗(yàn)要求。 圖1 PPARγ,c/EBPα,GAPDH凝膠電泳分析 Figure 1 Gel electrophoresis analysis of PPARγ,c/EBPαand GAPDH 注:A:PPARγ;B:c/EBPα;C:GAPDH;M:Marker 1 000 1.3 PPARγ和c/EBPα基因在蘇太豬不同組織中的表達(dá)情況分析 用qRT-PCR技術(shù)對(duì)心、肝、脾、肺等8個(gè)組織中PPARγ、c/EBPα基因mRNA進(jìn)行表達(dá)量水平分析，用內(nèi)參基因進(jìn)行均一化處理。結(jié)果顯示，PPARγ基因與c/EBPα基因在8個(gè)組織中均有表達(dá)，PPARγ基因在脾臟組織中的表達(dá)量最高，背最長(zhǎng)肌中表達(dá)量最低，不同組織中的表達(dá)量高低順序?yàn)槠?gt;皮下脂肪>肺>心>胃>腎>肝>背最長(zhǎng)肌；而c/EBPα基因在8個(gè)組織中皮下脂肪的表達(dá)量最高，背最長(zhǎng)肌為最低，其表達(dá)量的高低順序?yàn)槠は轮?gt;肝>脾>肺>腎>心>胃>背最長(zhǎng)肌(圖4;圖5)。 圖2 PPARγ基因擴(kuò)增曲線和溶解曲線 Figure 2 Amplification and dissolution curve of PPARγgene 圖3 c/EBPα基因擴(kuò)增曲線和溶解曲線 Figure 3 Amplification and dissolution curve of c/EBPαgene 2 討論 隨著生活水平的提高，人們對(duì)肉的風(fēng)味與品質(zhì)方面也更加關(guān)注。本試驗(yàn)以脂肪相關(guān)基因PPARγ和c/EBPα為候選基因，探究PPARγ和c/EBPα基因在蘇太豬的不同組織中表達(dá)水平。杜琛等(2016)通過(guò)PPARγ-shRNA慢病毒感染脂肪細(xì)胞后，在蛋白水平抑制PPARγ的表達(dá)，得出PPARγ基因有促進(jìn)絨山羊肌內(nèi)前脂肪細(xì)胞分化作用。龔蘭等(2011)研究表明，PPARγ可在骨骼肌細(xì)胞上有效表達(dá)并與IMF代謝呈一定關(guān)聯(lián)，PPARγ基因在豬骨骼肌細(xì)胞中有較高表達(dá)且與脂肪合成有正相關(guān)。韋璇等(2014)研究得出c/EBPα在脂尾型的羊和灘羊、肥臀型的哈薩克羊尾部脂肪組織中的mRNA表達(dá)水平較高，而在瘦尾型的陜北細(xì)毛羊、西藏羊尾部脂肪組織中表達(dá)水平相對(duì)較低，可知c/EBPα基因與脂肪的形成存在關(guān)聯(lián)。武春艷等(2014)研究轉(zhuǎn)錄因子互作調(diào)控雞脂肪細(xì)胞分化，發(fā)現(xiàn)c/EBPα基因過(guò)表達(dá)促進(jìn)PPARγ基因的啟動(dòng)子活性。宋新磊等(2008)研究發(fā)現(xiàn)c/EBPα與協(xié)同PPARγ作用影響脂肪細(xì)胞的分化。陳勝鋒等(2007)對(duì)原代培養(yǎng)大鼠脂肪前體細(xì)胞分化過(guò)程中PPARγ和c/EBPαmRNA的表達(dá)研究得出，在不同的時(shí)期PPARγ和c/EBPαmRNA的表達(dá)量不同，但到了一定時(shí)期后兩者表現(xiàn)為協(xié)同作用，共同維持脂肪細(xì)胞增值及分化，直至脂肪細(xì)胞成熟。試驗(yàn)結(jié)果表明c/EBPα和PPARγ基因的相對(duì)表達(dá)量在背最長(zhǎng)肌均為最低，在皮下脂肪中的相對(duì)表達(dá)量較高。PPARγ基因在蘇太豬在脾中的表達(dá)量為最高，皮下脂肪中的表達(dá)水平僅次于脾，背最長(zhǎng)肌與脾、肺和皮下脂肪的相對(duì)表達(dá)差異極顯著(p<0.01)，其余為差異不顯著(p>0.05)，表達(dá)量高低順序?yàn)槠?gt;皮下脂肪>肺>心>胃>腎>肝>背最長(zhǎng)肌；c/EBPα基因在蘇太豬的皮下脂肪的表達(dá)量最高，以背最長(zhǎng)肌中c/EBPα基因的相對(duì)表達(dá)量比較，在肝、脾、皮下脂肪組織中表達(dá)差異極顯著(p<0.01)，肺的相對(duì)表達(dá)差異顯著(p<0.05)，其余組織中差異不顯著(p>0.05)，表達(dá)量的高低順序?yàn)槠は轮?gt;肝>脾>肺>腎>心>胃>背最長(zhǎng)肌。結(jié)果顯示PPARγ和c/EBPα基因在皮下脂肪組織中都有較高的表達(dá)水平，在背最長(zhǎng)肌中的表達(dá)均為最低，PPARγ和c/EBPα基因在蘇太豬中各組織的相對(duì)表達(dá)量的趨勢(shì)趨于一致，推測(cè)PPARγ和c/EBPαx基因?qū)μK太豬的不同組織中脂肪沉積有協(xié)同作用。 圖4 PPARγ基因在組織的表達(dá)差異 Figure 4 PPARγgene expression differences in the organization 注:H:心;L:肝;Sp;脾;Lu:肺;K:腎;St:胃;LID:背最長(zhǎng)肌;SF:皮下脂肪;圖中相同字母之間差異不顯著(p>0.05),不同字母之間差異極顯著(p<0.01) 圖5 c/EBPα基因在組織的表達(dá)差異 Figure 5 c/EBPαgene expression differences in the organization 注:H:心;L:肝;Sp:脾;Lu:肺;K:腎;St:胃;LID:背最長(zhǎng)肌;SF:皮下脂肪;圖中相同字母之間差異不顯著(p>0.05),相同字母,大小寫(xiě)不同的之間差異顯著(p>0.01);不同字母之間差異極顯著(p<0.01) 3 材料與方法 3.1 試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)動(dòng)物選自貴州省白洗豬種質(zhì)資源保護(hù)基地，選用10月齡健康無(wú)疾病的蘇太豬，按照國(guó)家《生豬屠宰操作規(guī)程》(GB/T17236-1998)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行屠宰，采集心、肝、脾、肺、腎、胃、背最長(zhǎng)肌和皮下脂肪8個(gè)組織樣，錫箔紙包裝編號(hào)后放入液氮中保存，帶回實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩！ ?.2 主要儀器 高壓滅菌鍋、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、-80℃冰箱、PCR擴(kuò)增儀(C1000 TouchTM)、凝膠成像系統(tǒng)(Universal HoodⅡ)、電泳儀、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(型號(hào)為CFX96 Real-Time System)、高速冷凍離心機(jī)、電子恒溫水浴鍋、梯度PCR儀、制冰機(jī)、4℃冰箱、-20℃冰箱、振蕩器、小型離心機(jī)。 3.3 主要試劑 Trizol、氫氧化鈉、氯仿、液氮、異丙醇、75%乙醇瓊脂糖、0.5%TAE、槍頭、PCR管、1.5 m L離心管、5 m L與10 mL的塑膠試管、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(北京康為世紀(jì)生物科技有限公司)等。 3.4 Trizol法提取組織總RNA 采用Trizol法提取8個(gè)組織樣的總RNA，吸取1μL的RNA于超微量紫外分光光度計(jì)測(cè)定其濃度和純度(OD260/OD280=1.8～2.0)，并用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA提取效果，將剩余的RNA放入-80℃冰箱保存。 3.5 cDNA第一鏈的合成 本研究預(yù)先將RNA模板、dNTP Mix、primer Mix、RT Buffer、HiFiscript和RNase-Free Water置于冰上溶解備用，其詳細(xì)反應(yīng)體系如下：Control GAP-DH RNA(50 ng/μL)2μL、RiboLock RNase Inhibitor(20 U/μL)1μL、Primer Mix 1μL、5×Reaction Buffer 4μL、10 mmol/L dNTP Mix 2μL、Revert Aid RT(200 U/μL)1μL、Water(nuclease-free)9μL。將反應(yīng)物于PCR儀上42℃孵育50 min,85℃孵育5 min，反應(yīng)結(jié)束后，-20℃保存?zhèn)溆茫?μL反應(yīng)產(chǎn)物于超微量紫外分光光度計(jì)進(jìn)行濃度和純度檢測(cè)。 3.6 熒光定量PCR引物設(shè)計(jì) 從基因庫(kù)中查找PPARγ、c/EBPα目的基因，以GAPDH基因作為本次試驗(yàn)的內(nèi)參基因。用Primier5.0軟件設(shè)計(jì)引物，引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。RT-PCR擴(kuò)增引物的序列及其引物片段大小詳細(xì)信息如下(表1)。 表1 引物信息 3.7實(shí)時(shí)熒光定量PCR條件優(yōu)化及熒光定量PCR反應(yīng) 采用SYBR GreenⅠ熒光染料法在熒光定量PCR儀上進(jìn)行表達(dá)水平檢測(cè)，運(yùn)用RT-PCR摸索并優(yōu)化反應(yīng)條件，確定最佳反應(yīng)體系。以GAPDH作為內(nèi)參基因，用蘇太豬的心、肝、脾、肺等8個(gè)組織的c DNA為模板進(jìn)行PPARγ與c/EBPα基因的熒光定量PCR擴(kuò)增，反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性10 min;95℃變性13 s;59℃退火30 s;72℃延伸32 s；進(jìn)行循環(huán)40次后進(jìn)行溶解曲線分析：95℃15 s,60℃15 s，然后以每10 s上升0.5℃的速率從60℃升到95℃。每個(gè)組織樣品的每個(gè)基因要求3個(gè)平行重復(fù)，熒光采集時(shí)間為5 s。 3.8實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的處理分析及分析方法 本次試驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用2-△△Ct法分析PPARγ與c/EBPα基因在蘇太豬心、肝、脾、肺、腎、胃、背最長(zhǎng)肌和皮下脂肪8個(gè)不同組織中的差異表達(dá)量，測(cè)得的試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析。 參考文獻(xiàn) [1]Adams M.,Montague C.T.,Prins J.B.,Holder J.C.,Smith S.A.,Sanders L.,Digby J,E.,Sewter C.P.,Lazar M.A.,Chatterjee V.K.,and O'Rahilly S.,1997,Activators of peroxisome proliferator-activated receptor gamma have depot-specific effects on human preadipocyte differentiation,Journal of Clinical Investigation,100(12):3149-3153 [2]Chen S.F.,Zhu X.T.,Su G.,Gao S.J.,Gao P.,and Jiang Q.Y.,2007,Expression of PPARγand c/EBPαm RNA in primary cultured rat progenitor cells during differentiation,Fenzi Xibao Shegnwu Xuebao(Journal of Molecular Cell Biology),40(4):272-276(陳勝鋒,朱曉彤,束剛,高淑靜,高萍,江青艷,2007,原代培養(yǎng)大鼠脂肪前體細(xì)胞分化過(guò)程中PP-ARγ和c/EBPαm RNA的表達(dá),分子細(xì)胞生物學(xué)報(bào),40(4):272-276) [3]Du C.,Li J.Q.,and Chen X.J.,2016,Construction of lentiviral RNAi vector of PPARγgene in cashmere goat and its effect on proliferation and differentiation of intramuscular adipocytes,Xumu Shouyi Xuebao(Chinese Journal of Animal&Veterinary Sciences),47(4):671-678(杜琛,李金泉,陳秀娟,2016,白絨山羊PPARγ基因RNA干擾慢病毒載體的構(gòu)建及對(duì)肌內(nèi)脂肪細(xì)胞增殖分化的影響,畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),47(4):671-678) [4]Gao X.,Li F.Z.,Huan Y.J.,Liu Z.M.,Li X.,and Jiang Z.L.,Niu D.X.,and Song X.X.,2017,The expression patterns of KLF2 and PPARγduring the adipogenic redifferentiation of porcine DFAT cells,Xumu Shouyi Xuebao(Journal of Animal Husbandry and Veterinary),48(1):68-74(高霞,李方正,郇延軍,劉志敏,李秀,姜忠玲,牛德勛,宋學(xué)雄,2017,豬DFAT細(xì)胞成脂再分化過(guò)程中KLF2和PPARγ的表達(dá),畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),48(1):68-74) [5]Gong L.,Jin B.Q.,Zhang X.X.,Yin Q.,Yuan Y.G.,Zhao S.S.,and Zhu Y.,2012,Study on PPARγand RARαgenes of muscle cell with lipids metabolism in Shanzhu,Shipin Kexue(Food Science),(s1):62-67(龔蘭,金邦荃,章熙霞,尹強(qiáng),袁詠剛,趙莎莎,朱云,2011,雜交山豬骨骼肌PPARγ、RARα基因與脂代謝關(guān)系的研究,食品科學(xué),(s1):62-67) [6]Hua J.D.,Wang Z.L.,Huang X.G.,Shen J.L.,and Shi Z.B.,2003,Selection method and effect analysis of litter number of SuTai pig,Yangzhu(Raise pig),(5):21-23(華金弟,王子林,黃雪根,沈家林,施增斌,2003,蘇太豬產(chǎn)仔數(shù)的選擇方法及效果分析,養(yǎng)豬,(5):21-23) [7]Huangpu Y.F.,2013,C/EBPαinduce the trans-differentiation of bovine myoblasts,Dissertation for Ph.D.,Northest A&F U-niversity,Supervisor:Zan L.S.,pp.16(皇甫一凡,2013,C/EBPα基因誘導(dǎo)牛成肌細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的研究,博士學(xué)位論文,西北農(nóng)林科技大學(xué),導(dǎo)師:昝林森,pp.16) [8]Jiang M.H.,Ju T.T.,Liu Y.,Xu L.,Sun W.J.,Zhao P.F.,and Yin J.D.,2013,Dynamics of PPARγ,c/EBPαand Myogenin gene promoter methylation during myoblasts intracellular lipid accumulation,Chinese Nongye Kexue(Chinese Agricultural Science),46(14):3010-3021(姜美華,巨婷婷,劉洋,許玲,孫文娟,趙泮峰,尹靖東,2013,成肌細(xì)胞成脂過(guò)程中PPARγ、c/EBPα和Myogenin基因啟動(dòng)子的甲基化變化,中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),46(14):3010-3021) [9]Lin P.P.,Gao Z.Y.,Yuan Y.N.,Wu J.L.,Liu B.F.,Zhou S.S.,Qiao L.Y.,Liu J.H.,Liang C.,and Liu W.Z.,2012,Developmental expression of PPARαand PPARγm RNA in adipose tissues of different fat-tailed sheep,Xumu Shouyi Xuebao(Journal of Animal Husbandry and Veterinary),43(9):1369-1376(林婄婄,高中元,袁亞男,武建亮,劉寶鳳,周沙沙,喬利英,劉建華,梁琛,劉文忠,2012,PPARα和PPARγ基因在不同脂尾型綿羊脂肪組織中的發(fā)育性表達(dá)研究,畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),43(9):1369-1376) [10]Liu Y.,Lou S.Y.,and He Y.M.,2008,Effects of berberine on cell proliferation,peroxisome proliferation activated receptor gamma,CAAT/enhancer binding protein PPARγ,c/EBPαm RNA and protein expression in 3t3-L1 pre-adipocytes,Zhongguo Zhongxiyi Jiehe Zazhi(Chinese Journal of Integrated Traditional&Western Medicine),28(11):1005-1009(劉毅,婁少穎,何燕銘,陳偉華,應(yīng)健,王文健,2008,小檗堿對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞增殖及分化相關(guān)基因PPARγ、c/EBPαm RNA和蛋白表達(dá)的影響,中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,28(11):1005-1009) [11]Pan D.X.,Wang Z.,Yang M.L.,Liao Q.P.,Yang C.P.,Wu Y.P.,Wang J.Z.,and Liu R.Y.,2017,Association of the PPARγand c/EBPαgene expression with intramuscular fat content in different varieties of pig,Zhongguo Nongye Kexue(Chinese Agricultural Science),50(1):171-182(盤(pán)道興,王振,楊茂林,廖喬平,楊昌平,吳宇萍,王金洲,劉若余,2017,不同品種豬PPARγ和c/EBPα基因表達(dá)規(guī)律與肌內(nèi)脂肪含量的相關(guān),中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),50(1):171-182) [12]Song D.J.,Wang Z.Y.,Yang Y.,and Yao Y.C.,2014,The main factors affecting the quality of livestock and poultry and their mechanism of action,Xinan DaXue Xuebao(Journal of Southwest University),36(11):26-33(宋代軍,王子苑,楊游,姚焰礎(chǔ),2014,影響畜禽肉質(zhì)的主要因素及其作用機(jī)制,西南大學(xué)學(xué)報(bào),36(11):26-33) [13]Song X.L.,Wang J.,Cui H.X.,and Gao S.Z.,2008,Regulation of PPARγon lipid metabolism and adipocyte differentiation,Yunnan Nongye Daxue Xuebao(Journal of Yunnan Agricultural University),23(6):851-855(宋新磊,王靜,崔煥先,高士爭(zhēng),2008,PPARγ對(duì)脂類代謝和脂肪細(xì)胞分化的調(diào)控,云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),23(6):851-855) [14]Tontonoz P.,Hu E.,and Spiegelman B.M.,1994,Stimulation of adipogenesis in fibroblasts by ppar gamma 2,a lipid-activated transcription factor,Cell,79(7):1147-1156 [15]Wang N.D.,Finegold M.J.,Bradley A.,Ou C.N.,Abdelsayed S.V.,Wilde M.D.,Taylor L.R.,Wilson D.R.,and Darlington G.J.,1995,Impaired energy homeostasis in c/ebp alpha knockout mice,Science,269(5227):1108-1112 [16]Wang Q.G.,Wang P.,Ma J.,Li H.,and Zhang F.C.,2006,Expression of PPARγand c/EBPαprotein and its effects on abdominal fat in broiler,Zhongguo Jiaqin(Chinese Poultry),28(23):14-17(王啟貴,王娉,馬紀(jì),李輝,張富春,2006,雞PPARγ和c/EBPα的蛋白表達(dá)及其對(duì)肉雞腹脂含量的影響,中國(guó)家禽,28(23):14-17) [17]Wang Y.P.,Xu C.C.,and Luo H.L.,2017,Research progress of candidate genes related to intramuscular fat deposition in animals,Dongwu Yingyang Xuebao(Journal of Aanimal Nutrition),29(5):1475-1480(王怡平,徐晨晨,羅海玲,2017,動(dòng)物肌內(nèi)脂肪沉積相關(guān)候選基因的研究進(jìn)展,動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào),29(5):1475-1480) [18]Wei X.,Xu X.C.,Yang Y.X.,Wang X.L.,Chen Y.L.,Niu W.Z.,and Kou Q.F.,2014,Differentialexpression of CCAAT/enhancer binding proteinα(c/EBPα)and lipoprotein lipase(LPL)genes in tail adipose tissues of sheep(Ovis aries)with different types of tail,Nongye Shengwu Jishu Xuebao(Journal of Agricultural Biotechnology),22(5):598-606(韋璇,徐小春,楊雨鑫,王小龍,陳玉林,牛文智,寇啟芳,2014,CC-AAt/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α(c/EBPα)與脂蛋白酯酶(LPL)基因在不同尾型綿羊品種尾部脂肪組織中的表達(dá),農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào),22(5):598-606) [19]White U.A.,and Stephens J.M.,2010.Transcriptional factors that promote formation of white adipose tissue,Molecular&Cellular Endocrinology,318(1):10-14 [20]Wu C.Y.,Zhang Z.W.,Wang Q.S.,Wang Y.X.,Wang M.,Li Y.M.,and Li H.,2014,Crosstalk between transcription factors regulating adipocyte differentiation in chickens,Zhongguo Jiaqin(China Poultry),36(8):8-13)(武春艷,張志威,王秋實(shí),王宇祥,王寧,李玉茂,李輝,2014,轉(zhuǎn)錄因子互作調(diào)控雞脂肪細(xì)胞分化研究,中國(guó)家禽,36(8):8-13) [21]Xu D.Y.,2012,Su-Tai pig meat test,Yangzhi Yu Siliao(Breeding and Feed),(1):9-11(徐朵燕,2012,蘇太豬肉質(zhì)測(cè)定試驗(yàn),養(yǎng)殖與飼料,(1):9-11) [22]Yan Y.,Furumura M.,Numata S.,Teye K.,Karashima T.,Ohyama B.,Tanida N.,and Hashimoto T.,2015,Various peroxisome proliferator-activated receptor(ppar)-γagonists differently induce differentiation of cultured human keratinocytes,Experimental Dermatology,24(1):62-65 [23]Yu S.L.,Zhang X.,Su S.Y.,Zhou Y.,Li Q.F.,and Xie Z.,2011,Mplecular cloning of c/EBPαin lands geese and the effect of overfeeding on its m RNA expression level,Xumu Shouyi Xuebao(Journal of Animal Husbandry and Veterinary),42(4):495-502(于莎莉,張翔,蘇勝?gòu)?周陽(yáng),李齊發(fā),謝莊,2011,朗德鵝c/EBPα基因的克隆及不同處理對(duì)其在肝臟中表達(dá)的影響畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),42(4):495-502)
相關(guān)閱讀
